0.4%臺盼藍染色液一種陰離子型偶氮染料

0.4%臺盼藍溶液是一種陰離子型偶氮染料，其核心功能是通過染料排斥試驗區(qū)分活細胞與死細胞。

作用機制：活細胞的細胞膜完整，具有選擇透過性，能排斥臺盼藍分子；而死細胞或膜受損細胞的細胞膜通透性增加，臺盼藍可進入細胞內(nèi)，與蛋白質(zhì)結(jié)合使細胞呈現(xiàn)藍色。

濃度標(biāo)準(zhǔn)：0.4%為常規(guī)濃度，適用于大多數(shù)哺乳動物細胞的活力檢測，過高濃度可能導(dǎo)致背景染色干擾，過低則影響死細胞著色效果。

注意事項

時間控制：染色時間過長（>10分鐘）可能導(dǎo)致活細胞膜通透性改變，誤染為死細胞。

背景干擾：臺盼藍可結(jié)合血清蛋白，導(dǎo)致高背景染色。建議離心后用非蛋白培養(yǎng)基或PBS重懸細胞。

熒光淬滅：臺盼藍可能淬滅細胞表面或內(nèi)部的熒光信號，需與熒光染色實驗錯開進行。

個人防護：臺盼藍具有潛在致癌性，操作時需穿實驗服、戴手套和口罩。

染色步驟（僅供參考）

懸浮細胞：

離心收集細胞，PBS洗滌2次。

取10μL細胞懸液與10μL臺盼藍溶液混合，吹打均勻。

吸取少量混合液，注入血球計數(shù)板蓋片邊緣，使液體充滿計數(shù)室。

倒置顯微鏡下計數(shù)：活細胞無色，死細胞藍色。

貼壁細胞：

棄培養(yǎng)基，PBS洗滌后加入胰蛋白酶消化。

離心收集細胞，PBS洗滌后重懸于臺盼藍工作液，室溫孵育5分鐘。

離心棄上清，PBS洗滌后重懸，顯微鏡計數(shù)。